Un método nuevo para aislar e identificar directamente mutantes nit- en Escherichia coli K12

Resumen

Los métodos para aislar e identificar mutantes defectivos en la respiración anaeróbica del nitrato (Nit-) tienden a ser más específicos para ciertos genes mutados. En el presente trabajo se desarrolló un método denominado TNC, basado en una modificación del publicado por Fimmel y Haddock (1979), pero con mayores ventajas: no fue necesario incubar en anaerobiosis estricta, permitió ampliar el espectro de genes mutados (incluyendo mol y fnr) y detectar la aparición de colonias rojas muy rápidamente, en sólo 24 horas de crecimiento. La frecuencia de mutantes Nit- y la distribución de genes mutados fueron superiores, al usarlo comparativamente con el método de selección por resistencia al clorato. El TNC resultó muy sensible y con reproducibilidad para identificar diferencialmente clones mutantes Nit- (TNC+) y silvestres Nit+ (TNC-); además fue eficiente para caracterizar cepas bacterianas y en los análisis genéticos. En el presente trabajo también se estableció y evaluó un criterio de clasificación fisiológica para agrupar preliminarmente a los mutantes pleiotrópicos Nit- Gas- en cuatro subclases genotípicas, al observar que las mutaciones en moe revertían fenotípicamente con molibdato, en forma tardía.