Inmovilización orientada de anticuerpos anti-escherichia coli o157:h7 sobre soportes de oro modificados con tiourea

Pedro Matheus Romero, Jessiree Azuaje Quintero, Idelmar Carrillo Monterrey, Génesis Colina Nieto

Resumen


Se realizó el diseño y la preparación de un biosensor electroquímico para la detección de Escherichia coli O157:H7 enterohemorrágica conservada en agar durante 4 años en medio de cultivo BHI. La detección fue realizada mediante voltametrías cíclicas (VC) utilizando como soporte un hilo de oro (electrodo de oro) con 99,99% de pureza, 0,50mm de diámetro y 15mm de longitud, al que se le realizó una limpieza con diferentes lijas y se pulió con gamma-alúmina 3 (0,05micrón). Seguidamente se realizó la modificación de la superficie del electrodo de oro, sumergiéndolo en una disolución 5mM de tiourea, preparada en etanol-H2O (2:1), formándose monocapas autoensambladas de tioles sobre este. Posteriormente se realizó la inmovilización del elemento de bioreconocimiento, incubando los electrodos de oro modificados con tiourea en disoluciones de anticuerpos contra Escherichia coli O157:H7 a temperatura ambiente. Los mejores resultados para esta inmovilización se encontraron a pH 6,20, velocidad de barrido a 100mV/s y un tiempo de incubación de entre 30 minutos y 1 hora.

Recibido: 16-04-2024
Aceptado: 15-05-2024


Palabras clave


Escherichia coli O157:H7; monocapas autoensambladas; inmovilización orientada; anticuerpos anti-Escherichia coli O157:H7

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Referencias


- Carrillo, I., Colina, G. (2017). Diseño y preparación de un biosensor para la detección inmunológica de Escherichia coli O157:H7 en medio acuoso de KCl. (Tesis de pregrado). Universidad de Los Andes. Facultad de Farmacia y Bioanálisis. Mérida-Venezuela.

- Hu, R., Luan, J., Kharasch, E., Singamaneni, S., Morrissey, J. Aromatic functionality of target proteins influences monomer selection for creating artificial ntibodies on plasmonic biosensors. ACS Appl. Mater Interfac. 2017; 9(1):145-151. En: Matheus, P., Hernández, N., Navarro, P., Pacheco, E. Estudio Voltamétrico de la inmovilización de anticuerpos anti-Escherichia coli ATCC 25922 en electrodos de oro desnudos y modificados con tiourea. Rev. Inst. Nac. Hig. “Rafael Rangel”, 2017; 48 (1-2): 51- 66.

- Xu, M., Wang, R., Li, Y. Electrochemical biosensors for rapid detection of Escherichia coli O157:H7. Talanta. 2017; 162:511-522. En: Matheus, P., Hernández, N., Navarro, P., Pacheco, E. Estudio Voltamétrico de la inmovilización de anticuerpos anti-Escherichia coli ATCC 25922 en electrodos de oro desnudos y modificados con tiourea. Rev. Inst. Nac. Hig. “Rafael Rangel”, 2017; 48 (1-2): 51- 66.

- Abdalhai, M., Fernandes, A., Xia, X., Musa, A., Ji, J., Sun, X. Electrochemical genosensor to detect pathogenic bacteria (Escherichia coli O157:H7) as applied in real food samples (Fresh Beef) to improve food safety and quality control. J. Agric. Food Chem. 2015; 63(20):5017-25. En: Matheus, P., Hernández, N., Navarro, P., Pacheco, E. Estudio Voltamétrico de la inmovilización de anticuerpos anti-Escherichia coli ATCC 25922 en electrodos de oro desnudos y modificados con tiourea. Rev. Inst. Nac. Hig. “Rafael Rangel”, 2017; 48 (1-2): 51- 66.

- Wang, Ch., Kim, J., Zhu, Y., Yang, J., Lee, G-H., Lee, S., et. al. An aptameric graphene nanosensor for label-free detection of small-molecule biomarkers Biosens and Bioelec. 2015; 71:222-229. En: Matheus, P., Hernández, N., Navarro, P., Pacheco, E. Estudio Voltamétrico de la inmovilización de anticuerpos anti-Escherichia coli ATCC 25922 en electrodos de oro desnudos y modificados con tiourea. Rev. Inst. Nac. Hig. “Rafael Rangel”, 2017; 48 (1-2): 51- 66.

- Zacco, E. Diseño de nuevos materiales de afinidad universal. Aplicación en Sensores. Grupo de Sensores y Biosensores. Barcelona, España, Departamento de Química, Universidad Autónoma de Barcelona; 2006. En: Matheus, P., Hernández, N., Navarro, P., Pacheco, E. Estudio Voltamétrico de la inmovilización de anticuerpos anti-Escherichia coli ATCC 25922 en electrodos de oro desnudos y modificados con tiourea. Rev. Inst. Nac. Hig. “Rafael Rangel”, 2017; 48 (1-2): 51- 66.

- Matheus, P. (2003). Diseño y preparación de electrodos enzimáticos basados en interacciones específicas: Desarrollo de estrategias para su estabilización (Tesis Doctoral). Universidad Autónoma de Madrid. Facultad de Ciencias. Departamento de Química Analítica y Análisis Instrumental, Madrid España.

- Matheus, P., Abad, J., Navarro, P., Belandria, O., Hernández, N., Fernández, V.M. Efecto de la polietilenimina en la actividad catalítica de la peroxidasa de rábano (horseradish peroxidase) inmovilizada en electrodos de oro modificados con monocapas autoensambladas de tioles (SAMs). Avanc. Quím. 2009; 4(1):37-43. En: Matheus, P., Hernández N., Navarro, P., Pacheco, E. Estudio Voltamétrico de la inmovilización de anticuerpos anti-Escherichia coli ATCC 25922 en electrodos de oro desnudos y modificados con tiourea. Rev. Inst. Nac. Hig. “Rafael Rangel”, 2017; 48 (1-2): 51- 66.

- Matheus, P., Abad, J., Fernández, V.M. Modificación de superficies de oro para la inmovilización orientada de peroxidasa de rábano recombinante. Rev. Técn. Fac. Ing. Univ. Zulia. 2007; 30(3):225-35. En: Matheus P., Hernández N., Navarro, P., Pacheco, E. Estudio Voltamétrico de la inmovilización de anticuerpos anti-Escherichia coli ATCC 25922 en electrodos de oro desnudos y modificados con tiourea. Rev. Inst. Nac. Hig. “Rafael Rangel”, 2017; 48 (1-2): 51- 66.

- Gutiérrez, M. (octubre-diciembre 2005). Comportamiento de la Diarrea causada por Virus y Bacterias en Regiones cercanas a la Zona Ecuatorial. Colomb. Med., 36(3): 6-14.

- Koneman, E., Allen, S., Janda, W. (4ta ed.). (1992). Diagnóstico Microbiológico. Washington DC, Estados Unidos: Editorial JB Lippincott Company.

- Matheus, P., Hernández, N., Navarro, P., Pacheco, E. Estudio Voltamétrico de la inmovilización de anticuerpos anti-Escherichia coli ATCC 25922 en electrodos de oro desnudos y modificados con tiourea. Rev. Inst. Nac. Hig. “Rafael Rangel”, 2017; 48 (1-2): 51- 66.

- Sánchez, J. (2007). Optimización de un Método Voltamétrico para la Inmovilización y Detección de Vitamina K3 (Tesis de pregrado). Universidad de Los Andes. Facultad de Farmacia y Bioanálisis. Mérida-Venezuela.

- Matheus, P., Abad, J., Belandria, O., Fernández, V. (2008). Influencia del Estado de Oxidación del Ión Cobalto en la Estabilidad de Electrodos Modificados con Monocapas SAM-TOA-ANTA-Con+-HRP-NHis*. Avances en Química, 3(2): 69-77.

- Ocampo, A., March, C., Montoya, Á. (2007). Inmunosensores Piezoeléctricos: Revisión General y su Aplicación en el Análisis de Pesticidas. EIA, (7): 97-110.

- Zuzuarregui, A. (2013). Desarrollo de un Sistema de Detección de Endotoxinas basado en la Optimización e Implementación de un protocolo de Biofuncionalización sobre un Biosensor Electroquímico de diseño específico (Tesis Doctoral). Universidad de Navarra, Madrid-España.




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